什么是浮島效應(yīng)

導(dǎo)讀：什么是浮島效應(yīng) 灰樹(shù)花菌絲體的液態(tài)深層培養(yǎng)過(guò)程是怎樣的?

生物浮島技術(shù)是按照自然界自身規(guī)律,運(yùn)用無(wú)土栽培技術(shù)原理,采用現(xiàn)代農(nóng)藝與生態(tài)工程措施綜合集成的水面無(wú)土種植植物技術(shù)。以人工方式把高等水生植物或改良的陸生植物無(wú)土種植到富營(yíng)養(yǎng)化水域水面上,通過(guò)植物根系的截留、吸收、吸附作用和物種競(jìng)爭(zhēng)相克機(jī)理、水生動(dòng)物的攝食

灰樹(shù)花菌絲體的液態(tài)深層培養(yǎng)過(guò)程是怎樣的?

1.搖瓶培養(yǎng)液體菌種 這是液態(tài)深層生產(chǎn)灰樹(shù)花菌絲體工藝中最基本的技術(shù)。搖瓶培養(yǎng)的液體菌種數(shù)量較少，可供發(fā)酵罐接種用，也可直接用于栽培生產(chǎn)，一般適用于擴(kuò)接固體菌種（主要是栽培種），生產(chǎn)規(guī)模不大的菌種廠適宜采用。用搖瓶培養(yǎng)液體菌種，周期短，可連續(xù)多次擴(kuò)大培養(yǎng)（不超過(guò)5次），對(duì)發(fā)菌速度、菌種質(zhì)量一般無(wú)不良影響。

將培養(yǎng)液裝入500毫升三角燒瓶?jī)?nèi)，每瓶裝量為100毫升，加入10～15粒小玻璃珠或直徑在0.8厘米以下的玻璃碎片，用棉塞和牛皮紙封口，121℃滅菌40分鐘，取出冷卻至28℃時(shí)接種。每瓶接入斜面母種數(shù)小塊，使氣生菌絲一面向上懸浮于液面，在24～26℃恒溫下靜止培養(yǎng)48小時(shí)。當(dāng)氣生菌絲延伸到培養(yǎng)液中時(shí)，置往復(fù)式搖床上進(jìn)行振蕩培養(yǎng)，振蕩頻率為80～100次/分，振幅（沖程）6～10厘米；如果用旋轉(zhuǎn)式搖床，偏心距為4厘米，振蕩頻率為150～220轉(zhuǎn)/分，因旋轉(zhuǎn)速度過(guò)快，菌絲球一般較大，且菌絲球表面絨毛狀菌絲少，不適于做菌種使用。因此，一般旋轉(zhuǎn)式搖床的偏心距應(yīng)作適當(dāng)調(diào)整方可使用。搖床室溫度控制在24～26℃，培養(yǎng)72～96小時(shí)。食用菌種類不同，搖床培養(yǎng)的技術(shù)參數(shù)也有區(qū)別，灰樹(shù)花一般在25℃，200轉(zhuǎn)/分鐘，偏心距4厘米，搖瓶3～4天培養(yǎng)結(jié)束，培養(yǎng)液呈黃棕色，清澈透明，有許多菌絲小球，鏡檢菌絲球直徑，要求在1～2毫米內(nèi)。取樣品離心過(guò)濾（2500轉(zhuǎn)/分，15分鐘），105℃烘干至恒重，稱菌絲體干重，達(dá)10克/升即可。這樣的菌種可再擴(kuò)接于三角瓶?jī)?nèi)，每瓶接種菌液10毫升，繼續(xù)擴(kuò)大進(jìn)行搖瓶培養(yǎng)，因菌絲球正處于旺盛生長(zhǎng)狀態(tài)，分散度好，能縮短搖瓶培養(yǎng)時(shí)間，快者2天即可終止培養(yǎng)。如果培養(yǎng)液混濁，大多是細(xì)菌污染的結(jié)果。培養(yǎng)液經(jīng)顯微鏡檢查合格后，方可用于生產(chǎn)。搖瓶培養(yǎng)的液體菌種，在4℃冰箱中保存20～30天，在15～20℃室溫中保存5～7天，對(duì)接種成功率、產(chǎn)量均無(wú)不良影響。

在生產(chǎn)實(shí)踐中，也可因陋就簡(jiǎn)利用大號(hào)玻璃瓶制備液態(tài)菌種，但要有效果較好的空氣過(guò)濾裝置。

2.菌絲體的三級(jí)擴(kuò)大培養(yǎng) 一級(jí)種子罐定容35升，搖瓶種子通過(guò)裝有閥門的接種管接入，按5%～7%的比例接入搖瓶種子1.5～2升，按發(fā)酵工藝培養(yǎng)成熟；一級(jí)種子再接入二級(jí)種子罐，定容350升，按10%接入一級(jí)種子35升，培養(yǎng)成熟。無(wú)論哪一級(jí)菌種罐，在接種前須先將罐體空罐消毒（135～140℃）1小時(shí)，再注入培養(yǎng)液實(shí)消。程序是先預(yù)熱夾層至90℃，10分鐘后，放蒸氣進(jìn)入內(nèi)層升至115℃左右飽壓恒溫8分鐘，不宜過(guò)久，以免破壞養(yǎng)分。然后向夾層注灌冷水降溫，降至26℃即可接種。接種時(shí)，要注意開(kāi)排氣口，關(guān)進(jìn)氣口，降壓至0.05兆帕。同時(shí)抽樣鏡檢并用肉湯培養(yǎng)基檢查培養(yǎng)液滅菌情況。0時(shí)，取樣檢查雜菌、0.D值（光密度）、初糖；12、24、36、48小時(shí)，各取樣檢查一次0.D值、殘?zhí)?、pH。正常培養(yǎng)48小時(shí)后，pH降至5.0，0.D值凈長(zhǎng)0.5左右，糖耗一個(gè)單位左右，即可轉(zhuǎn)接容積較大的第三級(jí)培養(yǎng)罐。

第三級(jí)培養(yǎng)罐容積10噸，一般定容7500升，培養(yǎng)液與消泡劑（聚環(huán)氧丙烷甘油醚）同時(shí)加入，消泡劑加入量占培養(yǎng)液的0.03%為2.5升。按10%接種量（2個(gè)二級(jí)種子罐接1個(gè)三級(jí)罐）接入菌種。先空消罐體（14 0℃）1小時(shí)，再實(shí)消（115～118℃）50～60分鐘，然后降至25℃接種。前期培養(yǎng)溫度25～26℃，后期26～27℃。pH控制在5.5左右，降低時(shí)則流加尿素，加量一般為培養(yǎng)液的0.2%。發(fā)酵前期通風(fēng)量1∶05（體積/體積），中期溫度上升可加大通風(fēng)量至1∶1，并防止pH下降過(guò)快。接種后，葉輪轉(zhuǎn)速180轉(zhuǎn)/分，培養(yǎng)72小時(shí)后，中間每隔12小時(shí)取樣測(cè)糖、氮、pH、雜菌。中途補(bǔ)料可增加菌絲生長(zhǎng)速度，縮短發(fā)酵時(shí)間，增加菌體濃度。補(bǔ)料可分次在20小時(shí)、40小時(shí)、60小時(shí)補(bǔ)入，補(bǔ)入料量視具體情況而定。

注意控制培養(yǎng)時(shí)間，過(guò)早放罐菌絲體產(chǎn)量低，太遲則菌體老化自溶，三級(jí)罐一般培養(yǎng)3～4天即可。放罐標(biāo)準(zhǔn)：pH下降至5，殘?zhí)?.5左右，氨態(tài)氮不超過(guò)30毫克/毫升，菌球濃度達(dá)到1000～1500個(gè)/毫升，或經(jīng)3000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘，每100毫升菌泥濕重在20～25克。

液體菌種發(fā)酵要根據(jù)菌類生長(zhǎng)要求選擇不同工藝條件，灰樹(shù)花一般控溫25℃，罐壓0.05兆帕，通氣量（液體∶氣體）1∶0.3～0.5，攪拌200轉(zhuǎn)/分。

檢查發(fā)酵液質(zhì)量項(xiàng)目包括：純度檢查，鏡檢或平板培養(yǎng)無(wú)細(xì)菌、霉菌檢出；活力檢查，鏡檢菌球邊緣菌絲分枝細(xì)密，用結(jié)晶紫染色時(shí)著色深，菌絲細(xì)胞原生質(zhì)尚未出現(xiàn)凝集現(xiàn)象和空泡，培養(yǎng)液靜止5分鐘，菌泥不下沉；80%菌球直徑小于1毫米。

培養(yǎng)液經(jīng)板框壓濾或連續(xù)離心分離得菌絲體，經(jīng)烘干可以直接食用或作飲料、食品添加劑；也可提取灰樹(shù)花胞內(nèi)多糖，培養(yǎng)液濃縮可得胞外多糖，均可作為制備藥物的原料。

含大量菌絲的培養(yǎng)液可代替母種用于原種生產(chǎn)，也可代替原種用于栽培種生產(chǎn)。用液體菌種擴(kuò)大的菌種，發(fā)菌快，活力強(qiáng)，用于栽培定植快、污染率低。在大規(guī)模栽培中，菌絲體液可注接已滅過(guò)菌的栽培袋，一個(gè)5噸發(fā)酵罐，3天內(nèi)便可生產(chǎn)3.5噸液體菌種，按5%的接種量計(jì)算，500克干料的栽培袋注入液體菌種25毫升，3.5噸液體菌種可接種70噸培養(yǎng)料，約14萬(wàn)個(gè)栽培袋。

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